آنالیز گیاهان نارنج تراریخت حامل ژن پروتئین پوششی ویروس تریستیزای مرکبات (ctv)

درخت نارنج در اکثر مناطق مرکبات خیز دنیا به دلیل ویژگی های خوب زراعی به خصوص عملکرد میوه، کیفیت، سادگی و مقاومت به پاتوژن های مختلف و تنش های غیرزیستی سالهاست به عنوان پایه مادری مورد استفاده قرار می گیرد. امروزه استفاده از ترانسفورماسیون مرکبات ابزاری با اهمیت در اصلاح این گیاهان تلقی می شود. ریز نمونه ها جهت تولید شاخساره ی تراریخته، اپی کوتیل وهیپوکوتیل گیاهان نارنج بوده است که به مدت 4 هفته درتاریکی و10روزدر روشنایی رشد کرده بودند. باکتری مورد استفاده در ترانسفورماسیون agrobacterium tumefaciens نژاد eha 105 بوده است که حامل وکتور خاموشی pfgc5941 ،ژن کدکننده پوشش پروتئینی ویروس تریستیزای مرکبات(ctv)، ژن های انتخابی مقاومت به کانامایسین درخارج از ناحیه t-dna برای انتخاب باکتری های تراریخت و مقاومت به علف کش بستا درناحیه t-dna بوده ا ست. تراریزش از طریق همکشتی ریزنمونه هابه مدت 3روز با agrobacterium tumefaciensانجام شد.پس از تراریزش، ریزنمونه ها به محیط کشت انتخابی حاوی علفکش بستا با ترکیبی از تنظیم کننده های رشد 2 میلی گرم در لیتر bap و25/0 میلی گرم در لیتر naa منتقل شدند. تأیید اولیه گیاهان ترانس ژنیک با بررسی مقاومت گیاهچه ها به علفکش انجام شد .شاخساره های رشد یافته در محیط حاوی علفکش بستا وگیاهان سازگار شده به شرایط گلخانه برای این کارانتخاب شدند. مقاومت به علفکش بستا در محیط ms مایع با غلظت های متفاوت علفکش بستا انجام شد. واکنش pcr با آغازگرهای مربوط به ژن ctv، bar وreal-time برای محاسبه بیان ژن وتعداد کپی ژن ctv وتست الایزا انجام شد. نتایج به این صورت بود که گیاهانی که به علفکش مقاومت نشان داده بودند ،ابتدادر pcr ژن bar و ctv جواب مثبت دادند. سپس در real-time بیان ژن ctv ورودی وتعدادکپی های آن مشخص شد.